【公開日：2025.06.10】【最終更新日：2025.04.15】
課題データ / Project Data
課題番号 / Project Issue Number
24NU0027
利用課題名 / Title
植物細胞および細胞内小器官の三次元形態解析
利用した実施機関 / Support Institute
名古屋大学 / Nagoya Univ.
機関外・機関内の利用 / External or Internal Use
外部利用/External Use
技術領域 / Technology Area
【横断技術領域 / Cross-Technology Area】（主 / Main）計測・分析/Advanced Characterization（副 / Sub）-
【重要技術領域 / Important Technology Area】（主 / Main）次世代バイオマテリアル/Next-generation biomaterials（副 / Sub）-
キーワード / Keywords
電子顕微鏡/ Electronic microscope,生体イメージング/ In vivo imaging
利用者と利用形態 / User and Support Type
利用者名（課題申請者）/ User Name (Project Applicant)
大井 崇生
所属名 / Affiliation
高知工科大学 理工学群
共同利用者氏名 / Names of Collaborators in Other Institutes Than Hub and Spoke Institutes
谷口 光隆
ARIM実施機関支援担当者 / Names of Collaborators in The Hub and Spoke Institutes
中尾 知代
利用形態 / Support Type
（主 / Main）技術代行/Technology Substitution（副 / Sub）-
利用した主な設備 / Equipment Used in This Project
報告書データ / Report
概要（目的・用途・実施内容）/ Abstract (Aim, Use Applications and Contents)
イネ科雑穀シコクビエの葉身における葉緑体とその内部のデンプンの形状や配置の組織空間的な把握を目的とし、TEMによる超薄切片の観察で葉緑体内のデンプン粒を詳細に観察し、準超薄切片をトランスファーリング法でスライドガラスに回収して卓上SEM観察して葉組織中におけるデンプンの分布を確認した。
実験 / Experimental
電子顕微鏡観察用に化学または物理固定して脱水後に樹脂置換した植物試料の包埋ブロックを供試し、TEM、SEMあるいはFIB-SEMによって連続画像群を多量に取得して画像解析ソフト上で三次元再構築する実験系において、名古屋大学東山キャンパスにおける試料作製の補助、および超高圧電子顕微鏡施設内の前処理装置および各種観察装置の利用した。試料は、電子顕微鏡観察用に樹脂包埋された数ミリ四方未満の葉片あるいは数ミリ立方未満の組織片。基本的にオスミウム固定による重金属染色効果が得られる。加えて、切片作製後に酢酸ウラン（あるいは代替ウラン染色液各種）や酢酸鉛などで重金属染色が適宜施されている。
結果と考察 / Results and Discussion
今回は一連の実験系のうち、予備調査としてTEMおよび卓上SEMによる断面観察をまず行った。イネ科雑穀シコクビエの葉身試料を、一般的なTEM切片作製法にて100nm厚の超薄切片にし、汎用TEMにて100 kVの加速電圧で観察し、葉緑体内のデンプン粒を詳細に観察した。また、同試料の500 nm厚の準超薄切片を作製してトランスファーリングによってスライドガラスに回収し、電子染色および短時間（7秒）の金コーティングを行って卓上SEMにて15 kVの加速電圧で反射電子撮像し、葉組織中におけるデンプンの分布を確認した。葉緑体の微細構造やデンプンの形状の詳細な観察にはTEMが、葉組織中におけるデンプンの局在の把握には卓上SEMが適することが見出され、今後の研究展開の基盤が整えられた。
図・表・数式 / Figures, Tables and Equations
その他・特記事項（参考文献・謝辞等） / Remarks(References and Acknowledgements)
成果発表・成果利用 / Publication and Patents
論文・プロシーディング（DOIのあるもの） / DOI (Publication and Proceedings)
口頭発表、ポスター発表および、その他の論文 / Oral Presentations etc.
特許 / Patents
特許出願件数 / Number of Patent Applications：0件
特許登録件数 / Number of Registered Patents：0件